死菌か生菌か？　ＦＤＡ−ＥＢ染色

FDA-EB染色は、蛍光物質のFDA(fluorescein diacetate)が細胞内のエステラーゼで分解されると透過性のない蛍光物質となる。 結核菌をFDA-EB染色すると、エステラーゼ活性のある生菌のみが染色され、死菌の場合はEB(ethidium bromide)が核酸と結合して赤色に染色される。 生菌か死菌かを判別できるので有用性がある。 しかし慣れないと判定が難しい。

チューブ法 　　�@FDA液25μlとEB液25μlを菌液50μlと混合して室温で2分間放置。 　　�Aこの混合液1滴をスライドグラスに載せる。 　　�Bカバーグラスをかけて落射型蛍光顕微鏡でブルーフィルターを用いて観察。 スライド法 　　�@菌液を白金耳で直径10mm程度になるように広げて自然乾燥。 　　�Aバーナーで火炎固定をした後、FDA＋EB混合液を十分染み込ませたろ紙片を静かに乗せて、37℃で イ ンキュベーション。 　　�Bろ紙片が完全に乾燥したらろ紙片を取り除き、市販のマニキュアなどを用いカバーグラスをかけて封入し観察。